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        當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T阿尼昂尼昂病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        阿尼昂尼昂病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        阿尼昂尼昂病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
        PKA檢測(cè)試劑盒分子生物學(xué):核酸電泳、DNA Marker、克隆表達(dá)、PCR/Q-PCR、RT-PCR、基因組提取、質(zhì)粒提取、RNA提取、DNA純化回收、核酸純化相關(guān)試劑。

        更新時(shí)間:2021-03-13
        訪問(wèn)次數(shù):591
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        ?
        注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         阿尼昂尼昂病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

         英文名稱

         O'nyongnyong Virus(ONNV)RTPCR

         貨號(hào)

         LZP7083

        實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
        一、試劑準(zhǔn)備
        1. DNA模板
        2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
        4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
        三、注意事項(xiàng)
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
        2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
        一、 試劑的準(zhǔn)備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
        組成及試劑配制:
        1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
        2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
        Luciferase from Bacteria固藍(lán)B 90%N,N,N',N'-四甲基-O-(N-琥珀酸亞胺基)脲六氟磷酸鹽  98% 好

        Luciferase firefly高鐵試劑 98.5%三(N,N-四亞甲基)磷酰胺 98%

        Maltose Phosphorylase固藍(lán)BB鹽 AR1-對(duì)甲苯磺?;?3-硝基-1,2,4-三唑  98%

        Microcococcus lysodeikticus cells4-氟-3-硝基三氟甲苯 99%1-對(duì)磺酰咪唑 99%

        Mutarotase核黃素-5′-磷酸鈉鹽合物 73-79%(HPLC)O-(N-琥珀酰亞胺基)-N N N'N'-四甲基四氟酸脲  97%

        Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus vem戊菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,2,4,6-三吡啶基三  99%

        Phosphodiesterase II from bovine spleen甲脒鹽酸鹽 96%三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽 98%

        PLA2(+)-葑酮 standard for GC, ≥99.5% (GC)疊氮基*基硅烷 93%

        PAO甲酸 for LC-MS, ~98% (T)O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸酯 98%

         Protease S Aureus固黑K鹽 80%2,4,6-三異基苯磺酰氯 97%

        UTI固紅 3 GL Biological stainN,N,N′,N′-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽 99%

        COMT固紅RC 生化試劑級(jí)N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯并三-3-基)脲四

        Irganic Pyrophosphatase固紅TR半氯化鋅鹽 90%N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽 98%

        Phosphorylase b from rabbit muscle固紫B鹽 80%伍德沃德氏試劑K 98%

        Thermolysin from Bacillus thermoproteolyticus rokkoN-甲酰-L-甲硫氨酰-L-白氨酰-L苯氨酸 97%魏因勒卜鏈接劑 98%

        β-N-Acetylglucosaminidase(S)-(-)-2-甲酰胺琥珀酸酐 90%,工業(yè)級(jí)印刷標(biāo)簽,用于25G(ML)及以下包裝,尺寸: 94mm*28mm

        尼索地平Tyrosinase  酪氨酸酶(多肽抗原)SLC16A7/MCT2  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體

        尼索地平(標(biāo)準(zhǔn)品)OAT4L又稱URAT1 (Urate Transporter 1)  尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1 (抗原)SLC16A3/MCT4  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3/4抗體

        布洛芬VAP1(vascular adhesion protein 1)  血管粘附蛋白1(多肽抗原)SLC14A1/RACH1  尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體

        布洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Vimentin  波形蛋白(抗原)SLC12A3/NCCT  鈉氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

        馬來(lái)酸依那普利VSIG4 (V-set and immuglobulin domain-containing protein 4)  VSIG4 T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一(抗原)SLAMF9/CD2F-10  CD2F-10抗體

        馬來(lái)酸依那普利(標(biāo)準(zhǔn)品)WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with  lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4)  一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4(多肽抗原)SLAMF9  CD2F-10抗體

        氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle  鋅指蛋白300(抗原)SLAMF7/CD319  SLAMF7抗體

        氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a)  鋅指脂蛋白-1a(抗原)SLAMF6  SLAMF6抗體

        琥珀酸舒馬曲普坦ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b)  鋅指脂蛋白-1b(抗原)Skp2/skp2 p45  細(xì)胞S期激酶相關(guān)蛋白2抗體

        琥珀酸舒馬曲普坦(標(biāo)準(zhǔn)品)ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1c)  人鋅指脂蛋白-1c(抗原)SKP1  S期激酶相關(guān)蛋白1抗體
        阿尼昂尼昂病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:250克

        人紅細(xì)胞刺激因子(ESF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人紅細(xì)胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT支

        人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

        人紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

        人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

        人踝蛋白(talin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

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