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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
STPP2,7-二羥基萘 97%2,5-二氯苯 97%

Sodium metasilicate nahydrate7-甲氧基-2-萘滿酮 98%2-基苯酚 95%

Sodium stannate二(2-乙基己基)磷酸酯 95%1-甲基-3-硝基胍 98%(~25%water)

Sodium tungstate dihydrate二(2-乙基己基)磷酸酯 CP甲氨基乙縮二甲 97%

1-Naphthyl phsophoric acid sodium salt二(2-乙基己基)磷酸酯 95%3-氨基噻吩－2－羧酸甲酯 99%

2-Naphthyl phosphate sodium salt對(duì)苯醌 97%2-三氟甲酰氯 98%

Sodium bitartrate mohydrate對(duì)苯醌 99%鄰三氟甲酸 98%

Sodium formate對(duì)苯醌 用于光譜測(cè)定胺, ≥99.5% (HPLC)2-(三氟甲基)苯甲 98%

Sodium dodecaate鹽酸苯肼 99%2,4,6-三氯苯甲 97%

Sodium oleate苯肼 AR,98.0%帕莫酸 97%

Sodium stearate硫酸苯肼 CP,98.0%3-雙(2-羥乙基)氨基-2-羥基磺酸 98%

PAAS馬來(lái)酰肼 98%5,5'二硫代雙(2-甲酸) 98%

Sodium azide甲基三辛基氯化銨(R=C8-C10)  90%N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯胺鈉鹽 99%

ResorilN-丁基溴化吡啶 99%2-氯乙基磺酸鈉 98%

2-Amiphel芐基三丁基氯化銨 98%N-三(羥甲基)甲氨基-2-羥基磺酸 99%

3-Amiphel1-丁基吡啶鹽酸鹽 98%N-(3-磺基)-3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺鈉鹽 99%

精胺四鹽酸鹽;鹽酸精胺WDR5 (D9E1I) Rabbit mAbRabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗馬IgG

D-熒光素鹽，D-蟲(chóng)熒光素鹽Tyrosine Hydroxylase (A8Y7R) Rabbit mAbRabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgG

鹽酸雷尼替丁p63-α (D2K8X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgG

鹽酸雷尼替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)p63-α (D2K8X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗馬IgG

熒光素鈉PCNA (D3H8P) XP® Rabbit mAbRabbit anti-horse IgG whole serum  兔抗馬IgG抗血清

D-蟲(chóng)熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽PCNA (D3H8P) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-horse IgG  兔抗馬IgG

2ˊ,7ˊ-二氯熒光素鈉鹽Phospho-CDCP1 (Tyr707) AntibodyRabbit Anti-Guinea pig IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM

天青I;天青BCD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM

天青IICD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM

天青AUVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM
豬環(huán)曲病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/GPT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：300支/包

人天青殺素(AZU)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10個(gè)

人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升

人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克