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        貓細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家

        產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        貓細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家
        上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
        酸化真核翻譯延長(zhǎng)因子2100 ul

        豚鼠膽脂酶(CHE)ELISA試劑盒EEF2k 真核延伸因子激酶2100 ul

        豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒Phospho-EEF2k (Ser366) 酸化真核延伸因子激酶2100 ul

        更新時(shí)間:2021-03-13
        訪問次數(shù):406
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        注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

         產(chǎn)品名稱

         貓細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家

         規(guī)格

         50T

         貨號(hào)

         LZP7686

        組成及試劑配制:
        1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
        2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
        3、 樣品稀釋液:1×20ml。
        4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
        5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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        實(shí)驗(yàn)過程:
        一、試劑準(zhǔn)備
        1. DNA模板
        2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        ddH2O至               50 μl
        PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
        3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
        4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
        三、注意事項(xiàng)
        1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
        2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
        3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
        4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
        6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
        TCEP;三-(2-甲?;?膦鹽酸鹽NLRC4 (D5Y8E) Rabbit mAb四氟酸鋰

        N,N-二甲酰(分子生物學(xué)級(jí))IL-1β (D4T2D) Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氟-硝

        硫代硫酸鈉五水(AR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb (PE Conjuga)2--基-4,6-二甲基吡啶

        化鈉(AR)Smad1 (D59D7) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,5-二甲基-己炔-2,5-二

        可溶性淀粉Phospho-Src (Ser17) (D7F2Q) Rabbit mAb2-溴-6-氟甲

        硫脲Phospho-Bim (Ser77) (D4H12) Rabbit mAb1-N-Boc-吖丁啶羧酸

        化鈷六水(分子生物學(xué)級(jí))Keratin 17/19 (D4G2) XP® Rabbit mAb1-Boc-基氮雜環(huán)丁烷

        化鈷六水(AR)FIP200 (D10D11) Rabbit mAb2-溴-氟甲

        ,酚Phospho-DARPP-32 (Thr34) (D27A4) Rabbit mAb硫異煙

        異戊CD82 (D7G6H) Rabbit mAb羥基

        醋酸鋰,二水(AR)S5a/PSMD4 (D20B2) Rabbit mAb噻唑-2-甲酸

        聚蔗糖400MTMR3 Antibody3,5-二氟芐酰溴

        二硝基水楊酸PSMA3 (D4Y9O) Rabbit mAbS-Boc-氨甲基吡咯烷

        二酸鈉CK1ε Antibody2-(叔丁氧羰基氨基)-哌啶

        酸二氫鈉二水Puma (D30C10) Rabbit mAb1-Boc-磺酰氧基哌啶

        二酸(AR)Puma (D30C10) Rabbit mAbN-Boc-羥基氮雜環(huán)丁烷

        化錳四水LIS1 Antibody2-氟-5-(三氟甲基)酚

        葡聚糖凝膠S-100 HRVDAC (D73D12) Rabbit mAb (HRP Conjuga)-基酚

        豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒ECM1  細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1100 ul

        豚鼠甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒ECP  嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白100 ul

        豚鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒ED-1  外胚層發(fā)育不良100 ul

        豚鼠鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒EDNRA  內(nèi)皮素受體A100 ul

        豚鼠端粒酶()ELISA試劑盒EEF2  真核翻譯延長(zhǎng)因子2100 ul

        豚鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒Phospho-EEF2 (Thr56)  酸化真核翻譯延長(zhǎng)因子2100 ul

        豚鼠膽脂酶(CHE)ELISA試劑盒EEF2k  真核延伸因子激酶2100 ul

        豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒Phospho-EEF2k (Ser366)  酸化真核延伸因子激酶2100 ul

        豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒EGFR  表皮生長(zhǎng)因子受體100 ul
        貓細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原抗體Ethyl 3-(4-methoxyphenyl)propaate中文名:別名:分子式:C12H16O3

        軸突相關(guān)粘附分子抗體Decursidate中文名:別名:分子式:C18H18O6

        鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體Caffeic acid中文名:咖啡酸別名:分子式:C9H8O4

        阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體Methyl 3-(4-methoxyphenyl)propaate中文名:別名:分子式:C11H14O3

        老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS1抗體4-Allylpyrocatechol中文名:4-烯丙基兒茶酚別名:3,4-Dihydroxyallylbenzene分子式:C9H10O2
        檢測(cè)步驟:
        一、 試劑的準(zhǔn)備
        從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
        設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
        試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
        熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        總量 15 µL N×15µL
        1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
        7.2 qPCR反應(yīng)條件
        將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
        推薦循環(huán)條件:
        1循環(huán) 50℃ for 2 min
        預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
        PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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